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浸膏中叶黄素含量的检测方法

浸膏中叶黄素含量的检测方法

  • 范围

本方法适用于万寿菊浸膏中叶黄素含量的检测,本方法参考美国AOAC热皂化法鉴定叶黄素含量。

  • 实验仪器

紫外/可见分光光度计(SHIMADZU UV1700)

1cm比色皿

分析天平

水浴锅

超声提取器

1ml、2ml 、5ml、25ml移液管

50ml 、100ml容量瓶

3、化学试剂及药品

甲醇(分析纯)

丙酮(分析纯)

正己烷(分析纯)

甲苯(分析纯);

无水乙醇(分析纯)

无水硫酸钠(分析纯)

氢氧化钾(分析纯)

4、实验步骤

4.1试剂的配制

4.1.1 提取液的配制:正己烷、丙酮、无水乙醇、甲苯按照10:7:6: 7的体积比混合。

4.1.2 40%(w/v)氢氧化钾/甲醇溶液:称取40g氢氧化钾于100ml烧杯中,加入尽少量的水,用玻璃棒搅拌使之充分溶解,然后把溶液转移至100ml容量瓶中,少量甲醇多次冲洗烧杯,冲洗液也转移到容量瓶中,待溶液冷却至室温,再用甲醇定容至刻度,摇晃均匀。

4.1.3 10%硫酸钠溶液的配制:称取100g无水硫酸钠到1000ml烧杯中,加入约500ml已预热的蒸馏水(约50℃),用玻璃棒快速搅拌使之充分溶解,然后把溶液转移至1000ml容量瓶中,再用少量蒸馏水冲洗烧杯多次,冲洗液也转移至容量瓶中,待溶液冷却至室温后用蒸馏水定容至1000ml。

4.2 样品准备及检测

4.2.1样品称量前须放入56℃的水浴中搅拌均匀,确保样品有良好的均一性及流动性。

4.2.2 称取样品0.03~0.05g(实际称量重量可视样品具体含量而调整)于100ml容量瓶中。准确记录下称取重量(W)。

4.2.3 加入30ml提取液及2ml 40%KOH/甲醇溶液。

4.2.4 容量瓶接上冷凝管,于56℃水浴中加热20min。

4.2.5 取出容量瓶,盖上橡胶塞,冷水冷却至室温。

4.2.6 加入30ml正己烷,用10%硫酸钠定容至刻度,塞上塞子,剧烈振荡1min,于黑暗处放置约50min。

4.2.7 移取1ml上清液于50ml容量瓶中,正己烷定容至刻度,并摇晃均匀。正己烷作空白,于474nm波长处检测吸光值。

注:吸光值一定要控制在0.300~0.700范围内,如果超出此范围要调整稀释倍数。

4.2.8校正系数测定

4.2.8.1 苏丹Ⅰ标准品:苏丹Ⅰ用无水乙醇再次结晶的标准品:称取8克苏丹Ⅰ,加300ml乙醇75℃完全溶解,真空过滤,除去杂质,冷却结晶,再次过滤,70℃真空烘箱至恒重。

4.2.8.2苏丹Ⅰ浓缩液(1.0毫摩尔):苏丹Ⅰ标准品0.1241g溶于丙酮、异丙醇(1:1V/V)混合液500ml中,避光储存。

4.2.8.3苏丹Ⅰ工作溶液(0.04毫摩尔):吸取2ml浓缩液于50ml的容量瓶中,用丙酮、异丙醇(1:1)混合液中,摇晃均匀,于474nm处检测吸光值。

f=0.561/A474苏丹Ⅰ(0.04毫摩尔)

5、 计算

A474:样品在474nm处的吸光值

稀释倍数:2500

固定系数:236

W:样品重量(g)

f: 校正系数(4.2.8)

 

 

 

 

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